Chromatografie

Chromatografická vyvíjecí komora, chromatografická tenká vrstva typu Silikagel G, mikropipeta, odměrné válce 50, 25 a 5 ml, 3 ks kádinka 150 ml, Petriho miska o průměru min. 12 cm, pinzeta, fixýrka, umělohmotná miska. Acetátový pufr pH=5 o koncentraci 0,2 mol·dm^-3, aceton, roztok anisaldehydu v kyselině octové (1:100 objemově), konc. H₂SO₄, standardy glukózy, fruktózy a sacharózy (0,5% vodné roztoky – uchovávat v chladu), vzorek ovocné šťávy (ředit 10x).

Připravíme si 50 ml mobilní fáze o složení aceton-voda (9:1). Mobilní fázi nalijeme do vyvíjecí komory ve vrstvě okolo 1 cm a komoru uzavřeme. Na SiO₂ destičce si vyznačíme tužkou startovní linii a starty pro jednotlivé vzorky a standardy (1 cm od okraje a 0,5 cm od sebe). Vrstvu pak impregnujeme v 0,02 M roztoku acetátového pufru (naředíme 10x zásobní roztok, stačí cca 20 ml pufru) v Petriho misce. Po vyjmutí necháme vrstvu okapat a lehce oschnout. Na start naneseme standardy a studovaný vzorek mikropipetou v množství 5 µl.

Poté destičku vyjmeme, označíme čelo rozpouštědla a necháme oschnout volně na Petriho misce. Detekci provedeme roztokem anisaldehydu v kyselině octové, ke kterému těsně před postřikem přidáme 0,2 ml koncentrované kyseliny sírové (na 10 ml roztoku anisaldehydu). Po vybarvení vyhodnotíme polohy a barvy skvrn standardů a vzorku a určíme přítomné cukry. Z porovnání intenzity zabarvení skvrn vzorku a standardů odhadneme obsah jednotlivých cukrů ve vzorku ovocné šťávy. Stanovíme rovněž R_F pro jednotlivé standardy a vzorky.

Chromatografická vyvíjecí komora, stojánek, chromatografický papír (např. Whatman), mikropipeta, odměrné válce 100 a 25 ml, 3 ks kádinka 150 ml, Petriho miska o průměru min. 12 cm, pinzeta, třecí miska, Erlenmayerova baňka 100 ml, nálevka ve stojanu, filtrační papír. Kyselina octová, butanol, 0,1 M HCl, 1% standardní roztok chininu, vzorek léčiva s obsahem chininu.

Připravíme si mobilní fázi o složení butanol-kyselina octová-voda (75:10:15 ml). Mobilní fázi nalijeme do vyvíjecí komory a komoru uzavřeme. Vzorek léčiva homogenizaci na třecí misce extrahujeme kyselinou chlorovodíkovou o koncentraci 0,1 mol.dm^-3 v Erlenmayerově baňce (na 10 g vzorku 75 ml kyseliny). Po filtraci extrakt použijeme přímo k vlastnímu chromatografickému stanovení. Na SiO₂ destičce si vyznačíme tužkou startovní linii a starty pro vzorek a standard (minimálně 1 cm od okraje a 0,5 cm od sebe). Na start nanášíme standard a studovaný vzorek mikropipetou v množství 5 µl. Po oschnutí skvrn pověsíme papír do komory na věšáček tak, aby spodní část zasahovala do mobilní fáze a start byl přitom nad hladinou a uzavřeme. Necháme chromatogram vyvíjet, dokud hladina vzlínající mobilní fáze nedosáhne dráhy 7 - 10 cm. Poté papír vyjmeme a necháme nejprve oschnout volně na Petriho misce a krátce dosušíme v sušárně při mírně zvýšené teplotě (do 60°C).